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    醫(yī)療器械網(wǎng)稱 PCR檢測技術已經(jīng)廣泛應用于醫(yī)療研究機構和生物技術研究領域，那么，PCR檢測技術有哪些特點和技術要求呢？

    PCR即聚合酶鏈式反應（英文全稱：Polymerase Chain Reaction）。聚合酶鏈式反應（PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等幾步反應組成一個周期，通過酶標儀循環(huán)進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。

1.實時熒光定量PCR無需內(nèi)標
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。
1）Ct值的重現(xiàn)性：PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系：由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準與標本同步進行核酸提取的曲線定量方法。
2．內(nèi)標對實時熒光定量PCR的影響
若在待測樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標，則PCR反應變?yōu)殡p重PCR，雙重PCR反應中存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時，這種競爭會表現(xiàn)得更為顯著。但由于待測樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標。正因如此，定量方法雖然加入內(nèi)標，仍為一種半定量方法。
美國Texas大學的酶標儀科研人員進行了外標法定量和內(nèi)標法定量的方法學比較，得出的結論是：內(nèi)標法作為定量或半定量的手段是不可靠的，而外標準曲線的定量方法是一種準確的、值得信賴的科學方法。
Applied Biosystems公司的7700型實時熒光定量PCR儀是全球公認的熒光定量PCR的金標準，可實現(xiàn)多色熒光同時檢測，但定量檢測仍然采用外標準曲線的方法，而不用內(nèi)標進行定量。