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酶標(biāo)儀在用單波長(zhǎng)測(cè)定吸光度時(shí)，除受到測(cè)定內(nèi)源性干擾（包括噪音、漂移、電壓等）因素外，受液體表面張力的影響也很大。在檢測(cè)過(guò)程中，由于液面表面張力的作用，液體的表面不是一個(gè)平面，而是形成一個(gè)凹面，從側(cè)面看似凹透鏡，這樣不可避免會(huì)影響光路的正常通過(guò)。由于凹液面的影響，光線在通過(guò)液面時(shí)，除正常的被液體吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光線通過(guò)凹透鏡那樣），影響吸光度的檢測(cè)。而酶標(biāo)儀使用的又是通過(guò)光導(dǎo)纖維傳播的點(diǎn)光源，如果每次能在同一部位檢測(cè)，吸光度的重復(fù)性將得到保證，但由于機(jī)械運(yùn)動(dòng)等造成的誤差，不可能保證每孔都在相同部分被檢測(cè)，因此造成了孔與孔之間有一定的差異。

在雙波長(zhǎng)測(cè)定中，減少了測(cè)定干擾和電路干擾，因此測(cè)定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn)。由于液體表面張力的不同，導(dǎo)致單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)誤差較大。并且用不同的洗滌劑會(huì)影響到最后加入底物和終止液后的液面情況，醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后，形成的液面更凹，對(duì)單波長(zhǎng)檢測(cè)的影響更大，并且與表面活性劑的濃度成正比。而用中性蒸餾水洗滌后，單、雙波長(zhǎng)檢測(cè)技術(shù)結(jié)果基本一致。

在酶聯(lián)免疫法測(cè)定抗原、抗體中，常用標(biāo)記酶辣根過(guò)氧化物酶所使用的底物一般是鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，顯色終止后，二者在630nm和655nm處的吸光度值都只在吸收峰處（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，不會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。建議在進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)儀比色應(yīng)該首先雙波長(zhǎng)。這樣可以提高臨界值處標(biāo)本的分析準(zhǔn)度，減少實(shí)驗(yàn)誤差。