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基因組dna提取方法是什么?有哪些技術(shù)要點?
加入時間:2016-07-25 10:16:44  當(dāng)前新聞點擊率:4372

基因組dna提取的原則是必須保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性,還要排除其它分子(如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機溶劑等)的污染,使下游試驗順利進行。那么基因組dna提取方法是什么?有哪些技術(shù)要點呢?普朗醫(yī)療將為您簡單介紹一下。

基因組dna提取方法有很多,像傳統(tǒng)的DNA提取與純化,如CTAB 法、SDS 法是在裂解細胞的基礎(chǔ)上,多次苯酚氯仿等有機溶劑抽提使蛋白質(zhì)變性沉淀于有機相,而核酸保留在水相,達到分離核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA;然后加入異丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分離過程中殘留的有機溶劑和鹽離子,以免影響核酸溶解和抑制后續(xù)步驟的酶促反應(yīng),然后用TE 溶解DNA 備用。

另一種基因組dna提取方法是以螯合樹脂、特異性 DNA 吸附膜、離子交換純化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基礎(chǔ) DNA 提取的新方法。這些DNA提取新方法主要應(yīng)用于提取病毒、微生物、人和動物細胞、包埋組織樣品、古生物標(biāo)本及土壤環(huán)境樣品 DNA。

基因組dna提取方法

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基因組dna提取相關(guān)注意事項:

1.防止內(nèi)源性DNase,裂解緩沖液中的EDTA使DNA免遭DNase的降解。

2.保證得到高分子量的基因組DNA, 在制備基因組DNA過程中應(yīng)減少物理機械作用,防止基因組DNA的損傷。

3.保證基因組DNA不被蛋白質(zhì)所污染,否則將影響限制性內(nèi)切酶對DNA的酶切作用。

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